Anvisning till laboratorier om leverans av mikrobstammar och positiva prover till Livsmedelsverket (livsmedel, foder, gödselmedel)

Anvisning LAB 009, 5048/05.00.01/2022

Livsmedelsverket fungerar som nationellt referenslaboratorium för analys av den mikrobiologiska säkerheten hos livsmedel, foder och gödselmedel. Det utsedda laboratoriet ska lämna in mikrobstammar och/eller primärprover som isolerats för myndighetsprover och de egenkontrollprover som lagstiftningen förutsätter till Livsmedelsverket när undersökningsresultatet strider mot lagstiftningen eller tyder på en eventuell hälsofara.

1 Lagstiftning som förpliktar till leverans av stammar och prover

I tabellen nedan har man samlat den centrala lagstiftningen, på grundval av vilken laboratoriet måste förvara prover och sjukdomsalstrare samt uppgifterna om dem och skicka dem till Livsmedelsverket. Skyldigheten att lämna in stammar och prover gäller alla laboratorier som Livsmedelsverket har utsett och godkänt. Laboratoriet ansvarar för att även de mikrobstammar, virus- och livsmedelsprover samt anrikningsbuljonger som avses i denna anvisning levereras till Livsmedelsverket vid undersökningar som läggs ut på underentreprenad i utlandet.

Mikrobiella stammar (bakterier och virus) som isolerats från livsmedel, foder och gödselmedel samt prover i anslutning till dem levereras till Livsmedelsverkets enhet för mikrobiologi, med undantag av salmonellastammar som skickas till enheten för djurhälsodiagnostik i Kuopio.

Institutet för hälsa och välfärd ansvarar för en noggrannare undersökning av sjukdomsalstrare som isolerats från vattenprover. Mikrobstammar som isolerats från vattenprover levereras till Institutet för hälsa och välfärd i enlighet med Valviras anvisning. 

¹Livsmedelsverket ger anvisningar om tolkningen av förordningen om mikrobiologiska kriterier bl.a. i anvisning 4095/04.02.00.01/2020/

²Vid en epidemiutredning ansvarar Livsmedelsverket i enlighet med epidemiförordningen för närmare undersökning, typbestämning och uppföljning av alstrare av epidemier som isolerats från livsmedel, produktionsmiljön i livsmedelslokaler och primärproduktionsställen. På basis av detta ska alla sjukdomsalstrare som isolerats från livsmedel, deras produktionsmiljö (t.ex. gårdar, maskiner, anordningar, ytor) och primärproduktionsställen (t.ex. foder, vatten, obehandlad mjölk, djurprover) och som är av betydelse för epidemiutredningen lämnas in till Livsmedelsverket. Laboratoriet ska dock från fall till fall förhandla med den myndighet som ansvarar för epidemiutredningen om vilka alla sjukdomsalstrare som anses vara betydande med tanke på epidemiutredningen. 

2 Åtgärder vid epidemiutredningar

Närmare anvisningar om provtagning och undersökning vid epidemiutredningar finns i anvisningen LAB 020 Provtagning och undersökning i samband med utredning av livsmedelsburna sjukdomar.

Om man misstänker att en livsmedelsburen epidemi orsakas av något virus, STEC-bakterier eller vissa andra mer sällsynta sjukdomsalstrare som listas i ovan nämnda anvisning, undersöks livsmedelsproverna (och ytproverna för virus) vid Livsmedelsverkets enhet för mikrobiologi.

Vid epidemiutredningar ska laboratorieundersökningarna inledas snabbt. Om laboratoriet inte kan utföra alla nödvändiga undersökningar ska det i samarbete med tillsynsmyndigheten utan dröjsmål lämna in det antal prover som behövs till ett ackrediterat laboratorium, utsett av Livsmedelsverket, och som har beredskap att utföra de nödvändiga analyserna. En förteckning över de laboratorier som Livsmedelsverket utsett finns på Livsmedelsverkets webbplats.

Om det finns ett tillräckligt antal prover distribueras de upp så att en del av proverna förvaras för eventuella nya och/eller fortsatta undersökningar. Djupfrysta prover distribueras endast om distribueringen kan göras utan att provet tinas upp. Av stora provmängder och -partier undersöks ofta mer än ett delprov för att säkerställa att testdosens är representativ.

Alla prover i anslutning till epidemiutredningar, isolerade mikrobstammar och primärodlingar förstörs först när alla undersökningar i anslutning till epidemin har slutförts och det är säkerställt att det inte längre finns behov av ytterligare undersökningar. Den lokala arbetsgruppen för epidemiutredningar har till uppgift att besluta när undersökningsmaterialet får förstöras och underrätta laboratoriet om detta. Livsmedelsverket rekommenderar att prover i anslutning till epidemiutredningar förvaras i minst sex månader.

Vid misstanke om groddar som källa till intestinala patogener (t.ex. Salmonella) undersöks i första hand grodd- och sköljvatten från groddar som grott från frön samt färdiga groddar. Anvisning om groddning av frön för salmonellaundersökning finns som bilaga till denna anvisning. Man kan också undersöka frön, men ofta kan man inte påvisa målbakterier på dem. Bakterierna är stressade och skyddade under fröskalet och kan inte återhämta sig och föröka sig tillräckligt under förinkubationen. Fröskalet skyddar även mot dekontamination.

Rådgivning om analyser av livsmedelsburna bakterier och virus ges av Livsmedelsverkets enhet för mikrobiologi, som fungerar som stöd- och referenslaboratorium. Rådgivning om analyser av parasiter ger enheten för djurhälsodiagnostik. Kontaktuppgifter till Livsmedelsverkets experter finns här.  

2.1 Särdrag vid vattenburna epidemier

Det finns egna standardmetoder för att påvisa flera patogener i vatten. Om det inte finns några tillgängliga standardmetoder för vattenprover tillämpas andra motsvarande analysmetoder.

I undersökningar av vattenburna epidemier ger Institutet för hälsa och välfärds laboratorium för vattnets mikrobiologi rådgivning om både bakterie-, virus- och parasitundersökningar. Laboratoriet fungerar som stöd- och referenslaboratorium.

3 Förvaring av prover och isolerade mikrobstammar och leverans av dem för fortsatta undersökningar

Efter undersökningen ska det återstående provet förvaras i laboratoriet för eventuella ytterligare undersökningar och fortsatta undersökningar. Livsmedelsprover som kräver kylförvaring delas upp så att en del av provet fryses ner och en del förvaras i 4–6°C. Om provmängden är för liten för delning förvaras provet djupfryst (ca -20°C) för att förhindra förorening. Fiskprover som levereras för undersökning av stafylokockenterotoxin (rå eller rökt) får inte frysas, eftersom frysning försvårar konstaterandet av toxin i fisk. Det rekommenderas inte heller att man fryser ner prover som skickats till campylobakterieundersökning, eftersom nedfrysning kan påverka campylobakteriernas hållbarhet i provet.

Om provet är så litet att hela provet används för salmonellaundersökning, kan även det buffrade peptonvattnet som använts vid salmonellaanrikningen frysas, om det senare visar sig vara nödvändigt att göra andra patogenundersökningar. Virusundersökningar kan dock i regel inte längre göras med anrikningsbuljong som bas.

Mikrobstammar och virus som isolerats från prover och som bedömts vara betydande fynd ska förvaras för fortsatta undersökningar som görs vid Livsmedelsverket. Grundprincipen är att mikrobstammarna ska förvaras som en renodling och levereras färska för fortsatta undersökningar så snabbt som möjligt. Återkommande odlingar av särskilt bakterierna Clostridium perfringens och Yersinia ska undvikas så att deras virulensegenskaper inte förändras.

Ifall mikrobstammarna av särskilda skäl inte kan skicka inom ungefär en vecka efter isolering ska de frysas ner i lämpliga förvaringsrör (<=-15 °C) genast efter isolering.

Stammar av campylobakterier får inte frysas ner. De förvaras i en mikroaerob miljö och skickas till Livsmedelsverket så snart som möjligt. C. perfringens-stammar förvaras anaerobt.

3.1 Leverans till Livsmedelsverket

Mikrobiella stammar och prover enligt kapitel 1

AEn/anrikning, om det endast konstateras genom anrikning; en/kvantitetsbestämning, då den konstaterade stammen som tagit fram genom anrikning inte levereras.

Livsmedelsverkets laboratorium kan även undersöka prover för de sjukdomsalstrare som anges i tabellen ovan i andra fall än de som nämns i tabellen, om tillgången till undersökningar är begränsad och provets lämplighet för undersökning kan äventyras på grund av långa transportkedjor. Vid behov hjälper Livsmedelsverkets enhet för mikrobiologi till att hitta ett laboratorium som utför mer sällsynta mikrobiologiska undersökningar.   

Patogena bakteriers anrikningsbuljonger

Laboratoriet ska ha beredskap att kunna verifiera bakteriefyndet (med isolering som odlingsmetod) vid användning av t.ex. en snabbmetod som grundar sig på PCR-teknik. För vissa patogena bakterier görs verifieringsodlingen dock av Livsmedelsverket.

Vid STEC-analyser gör Livsmedelsverket verifieringsodlingar antingen för ett livsmedelsprov som levererats direkt (misstanke om matförgiftning) eller för en anrikningsbuljong (övriga undersökningar).

När inkuberingen avslutas tillvaratas cirka 30 ml (t.ex. 50 ml i provrör med kork) av STEC-anrikningsbuljongen, den blandas väl och man använder sedan en tillräcklig stor mängd för laboratoriets egna analyser innan resten sparas i kylskåpstemperatur (högst + 6 °C) för att kunna skickas till Livsmedelsverket för eventuella fortsatta undersökningar. En anrikningsbuljong som gett ett preliminärt positivt resultat är ett undersökningsresultat som tyder på en hälsorisk, och då ska anrikningsbuljongen skickas till Livsmedelsverket. Anrikningsbuljongerna ska skickas i god tid så att de är framme inom 4 dygn efter att anrikningen avslutats. Om det undantagsvis (t.ex. på grund av sockenhelg) är tvingande att förvara anrikningsbuljongen en längre tid före den skickas, ska anrikningsbuljongen frysas ner efter inkubering och levereras frusen till Livsmedelsverket. Proverna ska alltid skickas med kyltransport med snabbast möjliga leverans.

Proverna bör vara framme inom ett dygn. Provets lämplighet för undersökning kan försämras om leveranstidtabellen inte följs.

Livsmedelsverket har även beredskap att göra verifieringsodlingar av livsmedelsprover för Yersinia enterocolitica- eller Y. pseudotuberculosis-bakterier utifrån positiva PCR-laboratorieresultat. Då ska laboratoriet skicka in det ursprungliga livsmedelsprovet för kontroll, eftersom en tillförlitlig verifieringsodling inte kan göras av den anrikningsbuljong som laboratoriet sparar. Leverans av prover och undersökningar avtalas på förhand.

Närmare leverans- och transportanvisningar
Man ska undvika att leverera stora mängder renodlingar (>20 stammar) på en gång så att mottagningen och de fortsatta undersökningarna inte blir överbelastade. Det är önskvärt att leveransen är framme inom ett dygn efter sändning, så stammarna ska inte skickas på fredagar eller under sockenhelger. Om det är nödvändigt att skicka stammarna under ovan nämnda tider, till exempel i en epidemisituation, ska laboratoriet kontakta Livsmedelsverket före det skickar proverna.

Det är viktigt att renodlingarna av den misstänkta bakterien isoleras från primärodlingen för fortsatta undersökningar, eftersom:

• alla härdar av bakterier i grupp C. perfringens eller B. cereus eller koagulaspositiva stafylokocker som växer typiskt i selektiva plattor inte nödvändigtvis producerar enterotoxiner,
• endast en del av de härdar av en isolerad bakterieart som växer i primärodlingen genom anrikning kan vara patogena.
• även om alla stammar av en isolerad bakterieart skulle vara patogena genom att anrikning, kan det med hjälp av typningsmetoder växa stammar som skiljer sig från varandra, av vilka endast en del är av epidemityp.
  I regel levereras mikrobstammarna odlade på en skål med blodagar eller något annat lämpligt, icke-selektivt näringsunderlag. Det rekommenderas dock att salmonellastammarna skickas odlade på selektiv agar.

Campylobacterstammar skickas i transportrör (t.ex. Cary-Blair) eller på lämpliga agarplattor (t.ex. mCCD eller blodagar) förpackade i tätt förslutna transportpåsar försedda med gasgenerator avsedd för mikroaerofila bakterier.

C. perfringens-stammar och andra anaerobiska bakterier skickas på lämpliga plattor i transportpåsar med gasgenerator för anaeroba bakterier.

Virus och nukleinsyra som isolerats från virus levereras i regel djupfrysta så provets temperatur hålls <=-18 °C under transport.

Djupfrysta livsmedel förpackas så att de hålls så kalla som möjligt under transporten, helst <=-15 °C. Djupfrysta livsmedel får inte tina upp under transporten. För produkter som ska förvaras kallt (inkl. STEC anrikningsbuljonger) ska temperaturen hållas mellan +1 och +8 °C. Livsmedelsprover som ska förvaras i rumstemperatur förpackas så att deras temperatur inte överskrider +40 °C och så att de inte fryser.

Vid förpackning av provförsändelsen ska den transportörens anvisningar om sändning av laboratorieprover följas.

Förpackningarna ska vara täta och de får inte läcka under transporten.

4 Remisser och anvisningar

Till mikrobstammarna och proverna ska Livsmedelsverkets remiss bifogas för varje ändamål. Med stöd av 14 § i laboratorieförordningen ska följande uppgifter antecknas i remissen:

• kontaktuppgifter till undersökningens uppdragsgivare
• kontaktuppgifter till det laboratorium som skickar proverna
• identifikationsuppgifter om det prov som ska sändas och om stammen samt om det prov från vilket mikrobstammen har isolerats (uppgifter och beskrivning av provet; i fråga om livsmedel och foder även uppgifter om tillverkaren och partiet)
• provtagningsplats
• undersökningsresultat och metod som använts vid undersökningen
• provtagningsdatum
• datum då undersökningen inleddes
• datum för sändning av stammar och prover
• 
  Remisser och leveransanvisningar finns här. 

Leveranskostnader

I laboratorieförordningen föreskrivs att laboratoriet är skyldigt att lämna in stammar till Livsmedelsverket. Livsmedelsverket ansvarar inte för leveranskostnaderna, men laboratoriet kan fakturera kunden för leveranskostnaderna.

5 Undersökningar som görs vid Livsmedelsverket, avgifter för dem och rapportering av resultat

På prover och mikrobstammar som tagits emot och isolerats vid Livsmedelsverket kan man utföra vissa primära undersökningar och fortsatta undersökningar såsom identifieringar, bio-, sero- och genotypningar samt enterotoxin- och molekylärbiologiska undersökningar. Avgifterna för undersökningarna och hur resultaten rapporteras beror på lagstiftningen, på basis av vilken proverna skickas till undersökningarna.

Mikrobiella stammar och prover i anslutning till utredningar av livsmedelsburna epidemier

Fortsatta undersökningar av mikrobstammar som isolerats i samband med utredningar av livsmedelsburna epidemier är alltid avgiftsfria. Virus-, enterotoxin- och STEC-undersökningar av livsmedelsprover som misstänks ha orsakat en epidemi är avgiftsfria när en anmälan om misstanke om epidemi har gjorts i RYMY-systemet (beställaren av undersökningen ska då vara en tillsynsmyndighet). Livsmedelsprover i anslutning till enskilda insjuknade personer kan också skickas till Livsmedelsverket för undersökning med tanke på ovan nämnda sjukdomsalstrare, men då är undersökningen avgiftsbelagd. Undersökningsresultaten besvaras enligt undersökningsremissen med ett undersökningsintyg och på begäran även separat per e-post eller telefon. Undersökningsresultatet skickas också alltid för kännedom till Livsmedelsverkets enhet för mikrobiologisk livsmedelssäkerhet.

Mikrobiella stammar och prover som levererats till Livsmedelsverket med stöd av laboratorieförordningen

De fortsatta undersökningarna av mikrobstammar och prover som lämnats in med stöd av laboratorieförordningen är avgiftsfria och Livsmedelsverket undersöker dem enligt sin egen tidtabell och rapporterar i regel inte resultaten till leverantören eller uppdragsgivaren. Serotyperna för salmonellastammarna görs dock genast och resultaten meddelas till leverantören av stammen och till mottagarna utgående från undersökningsremissen.

Fortsatta undersökningar av mikrobstammar som isolerats i de riksomfattande och EU-medlemsstaternas gemensamma övervaknings- och uppföljningsprogram är avgiftsfria och Livsmedelsverket publicerar resultaten av de fortsatta undersökningarna i sin rapport.

Mikrobiella stammar som levererats på basis av zoonosprogram 

Fortsatta undersökningar av mikrobstammar som isolerats i nationella zoonosprogram är avgiftsfria och forskningsresultaten besvaras med ett forskningsintyg som levereras till leverantören och/eller beställaren samt till de mottagare som lagstiftningen förutsätter. Verifieringsodling av anrikningsbuljonger i proverna i STEC-uppföljningsprogrammet är avgiftsbelagd, men fortsatta undersökningar av stammarna görs avgiftsfritt enligt Livsmedelsverkets prövning.

Salmonellastammar som isolerats från foder, gödselmedel och biprodukter

Verifiering och serotypning av salmonellastammar är avgiftsfri och typningsresultatet meddelas det laboratorium som levererat stammen och eventuella mottagare.

Övriga mikrobstammar

Fortsatta undersökningar av mikrobstammar som isolerats från myndighets- och egenkontrollprover och som görs på begäran är avgiftsbelagda och undersökningsresultaten besvaras med ett undersökningsintyg utgående från undersökningsremissen. 

6 Referenser till lagstiftningen

Livsmedelslagen 297/2021

Statsrådets förordning om laboratorier som utför undersökningar enligt livsmedelslagen, foderlagen och hälsoskyddslagen, SRf 152/2015 (laboratorieförordningen)

Statsrådets förordning om utredning av livsmedels- och vattenburna epidemier, SRf 1365/2011, ändringarna har beaktats fram till 978/2022 (epidemiförordningen)  

Jord- och skogsbruksministeriets förordning om zoonoser, JSMf 316/2021, ändringarna har beaktats fram till 750/2024 (zoonosförordningen)

Foderlagen 1263/2020, ändringarna har beaktats fram till 18/2022

Lagen om animaliska biprodukter 517/2015, ändringarna har beaktats fram till 1118/2022

Lagen om djursjukdomar 76/2021, ändringarna har beaktats fram till 631/2025

Jord- och skogsbruksministeriets förordning om andra djursjukdomar som ska bekämpas, djursjukdomar som ska övervakas och andra anmälningspliktiga djursjukdomar, om anmälan om djursjukdomar samt om sändande av mikrobstammar, JSMf 325/2021, ändringarna har beaktats fram till 1069/2023

Kommissionens förordning (EG) nr 2073/2005 om mikrobiologiska kriterier på livsmedel jämte förändringar, ändringarna har beaktats fram till 2020/205 (förordningen om mikrobkriterier)

7 Bilagor

Bilaga 1 Anvisning för laboratorier för grodd av utsäde för salmonellaundersökning

Nödvändiga redskap

• Dekanterglas eller motsvarande sterilt kärl (volym 3-5 l för fodernlusern och ca 1 l för andra frön)
• Gasbinda
• Gummiband

Dag 1

• Mät upp cirka 1 dl frön i ett dekanterglas eller motsvarande kärl
• Skölj fröna i kärlet med ljummet kranvatten och häll bort vattnet efter sköljning
• Skydda kärlets öppning med en gasbinda som fästs rund kärlet med hjälp av ett gummiband. Lämna det skyddade kärlet i rumstemperatur i några timmar (3–4 h)
• Skölj fröna på nytt och häll bort sköljvattnet
• Avslutningsvis ska vatten tillsättas i kärlet så att fröna täcks, och öppningen ska skyddas med en gasbinda. Lämna fröna i rumstemperatur i ca 8–12 h (t.ex. över natten) 

Dag 2

• Blötläggningsvattnet tas till vara för salmonellaundersökning och ett prov på 25 ml undersöks
• Skölj fröna 2–3 gånger per dag, första gången genast efter att blötläggningsvattnet har tagits till vara
  •  Efter varje sköljning ska kärlets öppning skyddas med en gasbinda och kärlet förvaras snett med öppningen nedåt så att allt sköljvattnet kan rinna bort. Fröna får dock inte täppa till kärlets mynning helt så att luften kan cirkulera

Dag 3

• Skölj fröna 2–3 gånger per dag på samma sätt som dag 2
• Sköljvattnet från den sista sköljningen tas tillvara för salmonellaundersökning och ett prov på 25 ml undersöks
• 25 g av de grodda fröna undersöks med avseende på salmonella
  • om groddarna inte kan undersökas genast kan de förvaras i kylskåp i några dagar (t.ex. över ett veckoslut)
     

Ett utomstående laboratorium utanför Livsmedelsverket ska själv säkerställa att anvisningen kan tillämpas i sitt eget laboratorium

8 Ändringar i anvisningen

2025: Anvisningen har ändrats helt och hållet så att den endast gäller laboratorier. Alla anvisningar avsedda för tillsynsmyndigheterna har strukits och överförts till anvisningen LAB 020. Anvisningen har överförts till Pikantti som webbläsarbaserad.